1. 用胰蛋白酶消化后，將細胞懸浮，計數(shù)細胞，用 2 L 培養(yǎng)液將懸液稀釋至細胞密度為 2x104 個/ml。

2. 使小室長邊朝下，放置，將培養(yǎng)液供應管與 Luer 連接管相接，再通過供應管與底孔連通。

3. 經(jīng)供應管加入細胞和培養(yǎng)液。所有培養(yǎng)小室內(nèi)的液體將達到相同水平。

4. 按單層細胞平面將小室轉(zhuǎn)動 90度，使單元的短邊朝下，放置，使進孔和供應管朝上。

5. 在 Luer 連接管處，中斷供應管與培養(yǎng)液儲存器的連接。

6. 與細胞單層平面垂直，將培養(yǎng)小室轉(zhuǎn)動 90度，以底部放平，使培養(yǎng)面呈水平位。

7. 用 5% CO2 空氣向單元充氣 5 min，然后夾住供應管和出口。如果需要，可連續(xù)充氣。

8. 倒掉供應管和出口內(nèi)的培養(yǎng)液，然后將單元移入培養(yǎng)箱。

9. 更換培養(yǎng)液（或收集培養(yǎng)液）時，按步驟 6 的相反程序操作。除去輸入管上的濾器，然后按步驟 4 相反程序操作。

10. 擦洗 Luer 連接管，松開夾具，使培養(yǎng)液流出。

11. 按步驟 2~8 更換培養(yǎng)液。

12. 收集細胞。

(a)按步驟 9 和步驟 10 除去培養(yǎng)液。

(b)加入 500 ml D-PBSA，然后除去。

(c)加入 4℃的 500 ml 胰蛋白酶，30 s 后除去。

(d)用剩余的胰蛋白酶將細胞消化 15 min。

(e)加入培養(yǎng)液，搖動培養(yǎng)小室，使細胞懸浮。

(f)按步驟 9 和步驟 10 取出含細胞的培養(yǎng)液。

13. 殘留細胞可用于接種下一批細胞，雖然這種方法難以控制接種密度。最好是將培養(yǎng)小室丟棄，用新的小室重新開始培養(yǎng)。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。